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琼脂糖凝胶电泳涉及的步骤

  1. 为了制备凝胶,将琼脂糖粉与电泳缓冲液混合至所需浓度,并在微波炉中加热使其熔化。

琼脂糖凝胶浓度

  • 所用琼脂糖的百分比取决于要分离的片段的大小。
  • 琼脂糖的浓度是指琼脂糖相对于缓冲液体积的百分比(w / v),琼脂糖凝胶通常在0.2%至3%的范围内。
  • 琼脂糖浓度越低,DNA片段迁移越快。
  • 通常,如果目的是分离大的DNA片段,则应使用低浓度的琼脂糖,如果目的是分离小的DNA片段,则建议使用高浓度的琼脂糖。
  1. 将溴化乙锭添加到凝胶中(**终浓度为0.5 ug / ml),以促进电泳后DNA的可视化。
  2. 将溶液冷却至约60°C后,将其倒入装有样品梳子的浇铸盘中,使其在室温下固化。
  3. 凝胶固化后,将梳子移开,注意不要撕裂孔的底部。
  4. 仍在塑料托盘中的凝胶水平插入正规的购彩app下载注册 并用缓冲液覆盖。
  5. 然后将含有DNA与上样缓冲液混合的样品吸移到样品孔中,将盖子和电源线放在设备上,并施加电流。
  6. 可以通过观察电极上的气泡确认电流。
  7. 鉴于其负电荷,DNA将迁移至通常为红色的正电极。
  8. DNA迁移到凝胶中的距离可以通过肉眼监测跟踪染料(如溴酚蓝和二甲苯氰染料)的迁移来判断。